单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗体阳性植物物种非特异聊天、寡核苷酸装饰投入高或的操作具体流程简化。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯专家销售团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低总成本、跨种类、全游戏平台兼容的全新解决方案。

期刊论文简价

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由中华国家小学科理工大学显性基因与发肓怪物体学分析所和中华国家显性基因学精承办的国际性学界刊物，强院于报导怪物小学学科和碳原子怪物学显性基因学区域的爱独特性分析重大成果。JGG 202历经四年度反应系数7.1，Scopus学界刊物品价指标图CiteScore 9.9，稳居JCR 202历经四年度GENETICS & HEREDITY区域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY区域Q1区，稳居中华国家小学科理工大学刊物区别怪物体学类1区(Top刊物)，显性基因学和什么是生化与碳原子怪物体学小类双1区。

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什么东西是HEATag

巧用的“二一体化”来设计

HEATag是由凝集素和HUH内切酶产生的相融血清

「定位手机器」功能模块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化呈现（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「链接器」板块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）引索方形码实现共价相连接。

“1+1>2”的视觉效果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行范本标记符号与追溯。

Fig1: HEATag诸多标示方式关心图

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实战经验检验检测

HEATag说到底有能开打？

可不可以在的不同状况下，实现目标母乳喂奶生物组织体细胞系单组织体细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。探索团队合作为 HEATag 放置了多轮 “学习压力考试”，从上皮血细胞系到上皮血细胞，从干燥到低溫，从新鲜范例到比较固定范例，全方法认证它的保持稳确定和耐用性。

第1轮测式针对于辅乳期甲壳动物体生殖细胞系系：探讨职工选取了来源人、鼠、仓鼠这三个动物群的四种问题体生殖细胞系（HEK293T、K562、MEF、CHO），在高温下能 HEATag 记号后混合物测序。终于利用的 11447 个体生殖细胞系中，85.66% 都能依据 HEATag 条状码较准识别到原动物群，样版间交叉重合空气污染特少，UMAP 聚类算法剖析不仅可以直接證明，HEATag 条状码与动物群特情人dna组特点角度完全一致。 继续，测试仪前提进三步升到：科学研究拜谱生物去尝试在 4℃下箭头新鮮癌体細胞、在在常温下箭头甲醇稳固的癌体細胞，和简单箭头癌体細胞核。最终依旧会亮眼睛：各个前提下，样板元素与植物物种资料均都具有最好的涉及到性，分拆准确无误率超 95%。倘若甲醇稳固的会引发略微的转录本重叠造成的污染，癌体細胞核制法很有可能少量的 RNA 短缺，癌体細胞的类型的批注最终依旧会与新鮮样板稳定高度，证明书 HEATag 可不可以箭头不同的治疗前提下的实验设计样板。

Fig2: HEATag 可在不一状态下提交单受损细胞转录组混样探讨

会记号喂奶两栖节肢动物和深海无脊柱两栖节肢动物的原代细胞核

倘若说内部系测式是 “根本题”，那团体样板量正是 “扣减题”， 这样样板量都因内部款式繁琐、室内环境适宜性特有，称得上标记符号新技术的 “难题”，而 HEATag 正好在这样 “难题” 上出现了好处。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织安排，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞除了能被精确度辨别，各种主耍人体细胞种类的聚类算法效果都清晰明了可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋环境动物的替换性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长条形码查询与种群转录组兼有较高不一样性，沒有出来因高盐大环境产生的 “标上失灵”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可满足喂乳软体动物组织结构模板多厚 scRNA-seq 深入分析

Fig4: HEATag可实现目标新颖海洋环境无脊柱小动物很多 scRNA-seq 讲解

HEATag与组织的配合也不会所致转录组的可观改变了

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在成功符号目标的另外，都不会对售后的转录多组分析形成打扰，做到了理论研究统计数据的真实可靠性。

Fig5: HEATag不可能会影响样板的 RNA 表达方法摸式

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十年后的中国可期

HEATag 能为单血细胞研究探讨给我们有什么？

HEATag 的市场价值，远不单单于 “处理好图标话题”，它的灵活多变性和普遍性，已经为单体细胞调查另存多有不确定性

从用途场所来讲

HEATag 能包裹从 “简单易行很数据分析”（如癌阻止与正常的阻止、制剂进行处理与比对）到 “大投资规模化学习”（如阻止血组织图谱生成、高通芯片量挑选）的全区域实际需求。随 PIP-seq、Stereo-cell 等最新科技可突出技能的经济发展，HEATag 还能进第一步提拔单血组织学习的通量，助推科技团队图片做好很大投资规模化的新项目。

从跨各个领域升值空间看到

HEATag 实际上适用性于转录组学，还能与表观表观遗传组学、淀粉酶质组学、区域组学等工艺结合起来，借助定制网站指数和寡核苷酸字段，HEATag 能够 快速立足各种不同的组学操作流程，不关系数据信号驯服强度。并且，应用于HEATag还能够 發展单肿瘤细胞糖组学科研工艺。

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合作协议各式各样

拜谱海洋生物与陈凯院士形成分步战略合作意项

必玩观注的是，在 HEATag 技能体显现出出硕大使用价值的背景图片下，拜谱动物已与湖南省地区浅海科学科学调查与市政工程湖南省科学调查室管理（苏州）陈凯教学完成进行战略合作意愿。彼此之间准备环绕着 HEATag 技能的房产化洛地、调查管理转为等方面做好高度协同合作，推向上述低制造费、跨植物物种的单神经神经元标记图片技能更迅速使用于实际效果调查管理情景，为许多科学调查室管理给予效率、社会经济的单神经神经元调查用具，动力调查管理业务者在神经神经元动物学、浅海动物学、传染性疾病体制等领域行业授予许多进阶